单细胞悬液制备的原理

单细胞悬液的制备是单细胞转录组测序实验中的关键步骤，其原理主要包括以下几个方面：

1. 细胞的释放：单细胞悬液制备的首要任务是将细胞从胞外基质中有效地释放出来。这可以通过机械法或酶消化法实现。机械法包括研磨法、剪碎法、匀浆法等，通过施加压力使细胞从组织中释放5。而酶消化法则是通过水解组织间的胶原纤维和黏多糖物质，分开细胞间的紧密连接，达到制备单细胞悬液的目的5。

2. 限制对细胞活性和表面修饰蛋白结构的改造：在制备单细胞悬液的过程中，需要尽量减少对细胞活性和表面修饰蛋白结构的改造，以保持细胞的原有特性。这要求在制备过程中采用对细胞损伤小、产率较高的方法6。

3. 避免细胞损伤和死亡：在制备单细胞悬液时，应避免细胞损伤或死亡。例如，台盼蓝染料的原理是细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与细胞膜内的DNA结合，使其着色。而正常的活细胞，胞膜结构完整，能排斥台盼蓝，使之不能够进入细胞内1。

4. 细胞悬液的质量控制：单细胞悬液的质量受细胞活率、细胞浓度、结团率、背景（有核率）等因素的影响。因此，在制备过程中需要对这些因素进行控制，以确保单细胞悬液的状态和质量1。

5. 选择合适的酶类和条件：在酶消化法中，需要根据分散的组织类型确定使用的酶类，如胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等，并注意使用条件和影响因素，如酶浓度、酶效价、作用时间、pH值等6。

6. 避免细胞团块或连接成片：在培养细胞单细胞悬液的制备中，需要避免两个或多个细胞粘连在一块或细胞碎片过多，因为这将影响流式细胞术（FCM）的结果，可能导致实验失败7。

7. 组织取材的前处理：对于肿瘤组织等样本，在取材后需要进行适当的前处理，如检查组织是否被冲洗干净，去除因供血不足或免疫反应形成的坏死区域，以及检查组织运输回来后的冰袋及组织冻存液的剩余含量，以减少死细胞的产生并保持细胞活性8。

通过上述原理，科研人员可以制备出高质量的单细胞悬液，为后续的单细胞测序实验打下坚实的基础。