乳腺癌亚型生物标记物

背景及目的膀胱癌是世界上第九大最常见的恶性肿瘤,同时是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤。流行病学调查发现膀胱癌属于经济负担最重的肿瘤之一,主要体现在有创性随访、复发后再次电切、HGT1期治疗方案的争议、化疗耐药以及根治术后并发症等,因此研究其发病、进展及耐药机制并进行临床转化尤为迫切。HGT1期指膀胱癌细胞侵犯上皮下结缔组织,且病理分级是高级别,其5年肌层浸润率达到20%～48%。HGT1期患者治疗方式首选行保留膀胱还是膀胱癌根治术近年来仍存在争议。目前关于HGT1期根治术后的预后研究较少,因此在本文第二章节回顾性收集了近年来行膀胱癌根治术的HGT1期患者的临床资料,分析膀胱癌根治术治疗HGT1期膀胱癌的预后影响因素并对HGT1期膀胱癌治疗策略进行临床思考。未能识别低风险的癌症亚群常常会导致癌症患者的过度治疗,而预后生物标记物可能有助于提高风险鉴别和预测患者肿瘤术后复发的能力。因此,寻找新的、可靠的标记物来有效、准确地预测患者的疗效及预后已成为当务之急。EZH2在许多癌症类型中过表达,被认为是预后不良的一个标志。目前关于EZH2表达与膀胱癌侵袭性及预后关系的结果尚不明确,且尚未达成一致,因此本文第三章节探讨了膀胱癌患者肿瘤和良性组织中EZH2水平的差异,并分析EZH2是否可能成为一种与膀胱癌侵袭性及预后相关的有价值的生物标记物。近年来,探索不同生物标记物的组合对肿瘤进行亚型分类是临床风险评估的研究趋势。目前基于转录组学的研究已提出几种膀胱癌的分子分类系统,其中UNC分类将肌层浸润性尿路上皮癌分为腔内型和基底型,两组的分子特点反映了尿路上皮分化的不同阶段,其中腔内型表达高分化的伞状细胞的生物标记,例如CK20;而基底型表达低分化的基底细胞的生物标记,例如CK5及CD44等。前期的亚型分类研究均以转录组测序为基础,因此本文第四章节通过运用组织芯片及免疫组化技术检测膀胱癌中CK5、CK20、CD44在蛋白质水平的表达,并探讨联合CK5和CK20的表达与临床病理特征及预后的关系从而鉴别膀胱癌亚型。肌层浸润性膀胱癌的标准治疗方式为膀胱癌根治术,并根据具体情况选择基于铂类的新辅助化疗或辅助化疗缩小肿瘤大小、降低肿瘤复发或远处转移的概率。但铂类化疗耐药成为了困扰膀胱癌临床治疗以及影响患者预后的一大难题,因此寻找与膀胱癌化疗敏感的相关生物标记尤为重要。基础研究发现以铂类为基础的化疗的敏感性与DNA修复机制关系密切,因此本文第五章节将培养的顺铂耐药膀胱癌细胞株通过DNA修复通路PCR芯片以筛选与膀胱癌化疗耐药相关的生物标记物,并进一步探讨耐药的生物标记物在膀胱癌化疗患者诊疗中的价值。研究方法(1)回顾性收集90例HGT1期膀胱癌患者,采用Kaplan-Meier方法及Log-Rank检验进行生存分析,并通过单因素Cox回归分析及多因素Cox回归分析筛选出影响患者预后的因素。(2)回顾性收集189例接受治疗的膀胱癌患者的标本,采用免疫组化技术检测EZH2在膀胱癌中的表达,分析EZH2的表达水平与膀胱癌患者临床病理特征及预后的关系。(3)回顾性收集149例膀胱癌根治术后的标本,运用组织芯片及免疫组化技术检测膀胱癌中CK5、CK20及CD44在蛋白质水平的表达,并探讨联合CK5和CK20的表达与临床病理特征及预后的关系从而鉴别膀胱癌亚型。(4)构建T24、UMUC3膀胱癌细胞的顺铂耐药细胞株T24/DDP和UMUC3/DDP,并通过DNA修复通路PCR芯片在T24/DDP和UMUC3/DDP中筛选出DNA修复系统的耐药基因。结果(1)HGT1期患者膀胱癌根治术后的RFS、CSS及OS的独立危险因素为年龄和淋巴结阳性,RFS、CSS及OS的独立保护因素为HGB,肿瘤最大直径≥3 cm仅为OS的独立危险因素。(2)膀胱癌组织中EZH2表达明显高于正常尿路上皮;EZH2的表达水平与肿瘤分期、分级、淋巴结阳性同步升高;Kaplan-Meier分析结果表明EZH2高表达组的患者CSS和OS明显低于EZH2低表达组;多因素Cox回归结果提示EZH2蛋白表达与CSS和OS均无显著相关性,而淋巴结阳性均为CSS和OS的独立危险因素。(3)联合CK5和CK20表达形成CK5+CK20+、CK5+CK20-、CK5-CK20+及CK5-CK20-4个亚型;Kaplan-Meier结果表明CK5-CK20+亚型的PFS、CSS及OS均差于其他3种亚型;影响膀胱癌患者PFS、CSS及OS的独立危险因素均为病理T分期(肌层浸润)、淋巴结阳性及CK5-CK20+组。但在化疗患者群体中4个亚型尚未表现出明显的预后差异。(4)构建了T24/DDP细胞和UMUC3/DDP细胞;T24/DDP细胞的耐药指数约为8;UMUC3/DDP细胞的耐药指数约为10;DNA修复通路PCR芯片在T24和T24/DDP细胞中按照筛选标准筛选出4个差异表达上调的基因,包括APEX1、XRCC1、FANCG、PNKP;在UMUC3和UMUC3/DDP细胞中未筛选出差异表达基因。结论本文首先探讨了行膀胱癌根治术的HGT1期患者的预后因素,并且得出RFS、CSS及OS的独立危险因素为年龄和淋巴结阳性,RFS、CSS及OS的独立保护因素为HGB,肿瘤最大直径≥3 cm仅为OS的独立危险因素。由于HGT1期膀胱癌具有较大的异质性,仅依靠组织学分类尚不能完成个体化诊治,因此我们试图从分子层面进行膀胱癌的分子分型的研究,考虑到HGT1期患者组织标本不足无法进行深入研究,我们结合临床实际问题将研究对象扩大到所有膀胱癌及膀胱癌化疗耐药的生物标记物的筛查。我们根据前期工作及相关文献的报道,选取了EZH2、CK5及CK20作为候选生物标记物,其中膀胱癌中EZH2高表达与侵袭性生物学行为和不良预后相关,但尚不能提供独立的预后信息;联合CK5与CK20的表达可鉴别膀胱癌亚型,其中CK5-CK20+亚型预后最差,但在化疗患者群体中尚未表现出明显的差异,考虑样本过少。为进一步筛查膀胱癌铂类化疗耐药生物标记物,我们利用T24和UMUC3膀胱癌细胞株构建各自的顺铂耐药株T24/DDP和UMUC3/DDP细胞,并且通过DNA修复通路PCR芯片筛选出差异表达的基因,这些发现为进一步研究DNA修复基因在膀胱癌化疗耐药中的作用奠定了基础。

[研究背景与目的]多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme,GBM)是一种常见的、致命性的中枢神经系统肿瘤,约占神经胶质瘤的60～70%,属于高级别胶质瘤。GBM具有高致死率、高复发率的特点,即使采取积极的临床治疗,患者的生存率依然较低。GBM的发生机制和有效治疗策略是目前的一个研究热点。随着研究的深入,人们对多形性胶质母细胞瘤生物学特点的了解日益增多,新的治疗靶点也被逐渐发现,已有研究证实多个信号通路参与GBM的产生、发展和耐药与复发的过程中,但是目前对于GBM患者的生存预测和治疗效果仍不理想。由于GBM抗药性的分子机制尚不清楚,灵敏而准确的GBM生物标记物不仅可用于指导靶向治疗,还可有效预测患者的预后,为人们明确诊断和治疗靶点、制定个体化治疗方案提供依据。此外,由于GBM对常规治疗手段不敏感,开发具有临床疗效的治疗药物亦已成为当今医学界迫在眉睫的一个难题。人们发现盐霉素具有抗肿瘤干细胞的作用,它对乳腺癌干细胞的杀伤效果甚至比传统抗癌药物紫杉醇高100倍以上。此外,中国传统中药雷公藤甲素也具有抗癌谱广泛、抗癌活性强等特点。基于上述原因,本论文将对GBM预后生物标记物进行筛选与鉴定,并通过细胞实验验证盐霉素和雷公藤甲素在抗GBM治疗中的作用。[研究内容与结果]本研究首先探索CD44与多形性胶质母细胞瘤预后的相关性,以及下调CD44对多形性胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。利用TCGA数据库中的基因芯片数据集和R2基因分析可视化平台,分析CD44与多形性胶质母细胞瘤患者生存时间的关系,并通过siRNA干扰抑制CD44的表达,检测CD44下调对多形性胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。研究发现,CD44高表达患者的预后更差,下调CD44可明显抑制胶质母细胞瘤细胞增殖。其次,筛选GBM组织中与CD44高度共表达的基因,分析其与GBM预后的关系,鉴定一组GBM预后生物标记物基因簇。结果发现,GBM组织中ABCC3、TNFRSF1A和CD44高度共表达,且CD44、ABCC3和TNFRSF1A的表达水平明显高于非肿瘤脑组织。进一步,验证盐霉素对GBM细胞及干细胞的杀伤作用,检测盐霉素对GBM细胞增殖和迁移的影响,以及对多形性胶质母细胞瘤干细胞增殖的影响,并检测盐霉素对GBM细胞CD44、ABCC3和TNFRSF1A蛋白和mRNA表达的影响。结果发现,盐霉素能有效抑制GBM细胞增殖、迁移、促死亡,并能抑制GBM干细胞增殖,盐霉素能下调CD44、ABCC3和TNFRSF1A蛋白和mRNA的表达。最后,检测盐霉素和雷公藤甲素单独或联合处理时对GBM细胞及其干细胞增殖的影响,评估雷公藤甲素和盐霉素的联合效应。结果发现,雷公藤甲素能协同盐霉素杀伤多形性胶质母细胞瘤细胞及其干细胞。[结论]CD44的表达水平可作为预测多形性胶质母细胞瘤预后的指标及潜在的治疗靶点;CD44、ABCC3和TNFRSF1A可结合MGMT组成一组基因簇,用于预测多形性胶质母细胞瘤患者对传统抗GBM治疗的反应;盐霉素对GBM细胞及其干细胞具有较强的杀伤作用,并且可以通过下调CD44、ABCC3和TNFRSF1A的表达发挥其抗肿瘤作用;雷公藤甲素能协同盐霉素杀伤GBM细胞及其干细胞,是一种潜在的化疗增敏药物。

目的:探讨乳腺癌生物标记物HER2和ER、PR不同表达水平组间的乳腺癌超声征象的差异。方法:收集我院诊治的乳腺癌患者62例70个病灶,行免疫组化检测乳腺癌组织中乳腺癌生物标记物HER2和ER、PR、Ki-67的表达,根据上述生物标记物的表达水平进行分组,观察各组的超声征象包括后方回声、血流紊乱、边缘、内部强化方式、肿块形状及肿块大小等。结果:与HER2阴性组比较,HER2阳性组的边缘不整齐、分叶状和内部低回声等超声征象方面比较差异具有统计学意义(P<0.05);与ER和PR均阴性组比较,ER和PR均阳性组的肿块内部血流等级、内部强化方式和后方回声等方面比较差异具有统计学意义(P<0.05);与Ki-67低表达组比较,Ki-67高表达组纵横径比、内部强化方式和血流等级等方面比较差异具有统计学意义(P<0.05);其他征象各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:乳腺癌生物标记物的表达水平可呈现不同的超声征象特征,通过超声检测技术可在一定程度上反应肿瘤的恶性生物学行为特征和生物进展过程,对指导临床诊治具有重要的临床意义。