293T细胞真菌污染两性霉素B处理浓度和时间

2010年8月13日，中央电视台新闻联播首次报道“超级细菌向全球蔓延”，此后国内多家媒体对“NDM－1超级细菌”的感染进行了报道并逐渐引起了人们的关注。NDM－1全称为NewDelhimetallo-β—lactamase1，是一种金属B内酰胺酶，学名为“I型新德里金属蛋白酶”，可以水解目前较常使用的三代头孢菌素及碳青霉烯类抗生素，其基因可在不同菌种中间传递，

目的：探索红色糖多孢菌红霉素eryG基因在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法：以红色糖多孢菌总DNA为模板,PCR扩增出eryG基因序列,克隆到原核表达载体pET-22b（＋）上,并使其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。从诱导剂IPTG的终浓度和诱导时间两个因素来优化eryG基因的表达条件。结果：eryG基因可以在大肠杆菌中表达,表达产物EryG经SDS-PAGE分析相对分子质量约为33×10^3。表达条件经优化后,重组蛋白EryG表达量占菌体总蛋白的55%以上。结论：红色糖多孢菌红霉素eryG基因可以在大肠杆菌中高效地表达,为进一步研究EryG的相关酶学性质、分析其对红霉素发酵产物的影响奠定了基础。

四环素类（TCs）是由链丝菌产生或再经半合成制得的一类广谱抗生素，主要通过抑制细菌的蛋白质合成而发挥抑菌作用。TCs应用较早，由于其大量使用，耐药菌株日渐增多，加之易引起骨质色素沉积和“四环素牙”等不良反应，其抗生素作用已逐渐被其他药物取代。随着对其药理作用认识的深入，发现TCs尚具有多种非抗生素特性，如抗炎、免疫抑制、清除机体氧自由基等，大大扩展了其临床药理学范围。对其构效关系的进一步研究表明，四环素环系5～9位的基团变化对其抗菌作用无显著影响，而对环系1～4位或10～12位基团进行改造，则可能使其抗菌活性大大降低甚至完全失活。在此理论的指导下，国外药物研究人员合成出一批经特殊化学修饰的四环素（CMTCs），其抗菌活性被降低或清除，故长期用药，机体内有益菌丛不会受到明显影响，也不存在酵母菌和真菌的过度生长及二重感染等问题，有利于其他治疗作用的发挥，这对进一步研究TCs非抗生素特性有十分重要的意义。已知天然TCs主要有四环素、土霉素、金霉素以及地美环素（去甲金霉素）等；常见的CMTCs主要有多西环素（强力霉素）、美他环素（甲烯土霉素）及米诺环素（美满霉素）等。近年来，对TCs药物非抗生素性质的研究更有明显进展，并逐渐用于临床，展现了这一老药新用的广阔前景。