在大肠杆菌高密度培养过程中,如何克服其代谢过程中产生的乙酸对生长抑制?
在大肠杆菌的高密度培养过程中,乙酸的产生是一个主要问题,因为它会抑制细胞的生长和重组蛋白的生产。以下是一些克服这一问题的方法:
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控制葡萄糖浓度:葡萄糖是大肠杆菌发酵过程中的重要碳源,控制其浓度在较低水平可以减少乙酸的产生。常用的控制方法包括恒pH法,大肠杆菌代谢葡萄糖产生乙酸,使pH值下降,通过维持pH值可以控制葡萄糖的消耗速率。2
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激活乙醛酸旁路:在高葡萄糖浓度下激活乙醛酸分流途径,可以减少乙酸盐的积累。分批培养物的代谢通量分析支持大肠杆菌BL21中乙醛酸旁路的活性。6
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使用中空纤维膜过滤器:通过中空纤维膜过滤器除去发酵过程中产生的乙酸,可以在较高的葡萄糖浓度下培养重组大肠杆菌,得到较高的密度。7
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加入大孔离子交换树脂:在培养基中加入大孔离子交换树脂,可以吸附发酵期间产生的乙酸,降低培养基中乙酸的量,从而增加目标产物的产量,并缩短发酵时间。7
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保证供氧能力:保证设备的供氧能力大于摄氧能力,可以促进菌体利用营养物生长代谢,减少乙酸的产生。8
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改进培养方式和优化诱导方式:改进高密度发酵培养方式、优化诱导方式和诱导剂,对实现重组大肠杆菌高密度高表达发酵工业化生产具有重大意义。410
通过上述方法,可以有效控制大肠杆菌在高密度培养过程中乙酸的产生,减少其对细胞生长和重组蛋白生产的抑制作用。
乙酸在大肠杆菌高密度培养中是如何产生的?
在大肠杆菌的高密度培养过程中,乙酸的产生主要与葡萄糖的代谢有关。当大肠杆菌在葡萄糖培养基上快速生长时,乙酸作为副产物会大量积累。这是因为在高浓度葡萄糖或高比生长速率的条件下,大肠杆菌会通过代谢葡萄糖产生乙酸,从而抑制细胞生长和重组蛋白的生产。139
透析技术在降低乙酸含量中的具体作用是什么?
透析技术在降低大肠杆菌培养过程中乙酸含量的具体作用是通过小分子经过半透膜扩散到水(或缓冲液)的原理,将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。在大肠杆菌的培养过程中,透析技术可以除去发酵液中的有害物质,降低乙酸含量,从而实现重组菌的高密度发酵和产物的表达。25151620
控制葡萄糖浓度的方法有哪些?
控制葡萄糖浓度的方法主要包括以下几种:
- 恒pH法:通过维持培养基的pH值,减少乙酸的产生,从而控制葡萄糖的浓度。
- 透析技术:利用透析技术除去发酵液中的有害物质,降低乙酸含量,间接控制葡萄糖浓度。
- 代谢通量分析:通过分析大肠杆菌的代谢通量,优化培养条件,减少乙酸的积累,从而控制葡萄糖浓度。
- 乙醛酸旁路:在高葡萄糖浓度下激活乙醛酸分流途径,减少乙酸盐积累,控制葡萄糖浓度。25629
乙醛酸旁路在大肠杆菌中的作用是什么?
乙醛酸旁路在大肠杆菌中的作用主要体现在以下几个方面:
- 减少乙酸积累:在高葡萄糖浓度下激活乙醛酸分流途径,可以减少乙酸盐的积累,从而提高大肠杆菌的生长和生产效率。
- 提高代谢效率:乙醛酸旁路的活性可以促进大肠杆菌的代谢过程,提高其对葡萄糖的利用效率。
- 改善生长条件:通过优化乙醛酸旁路的代谢和调节酶,可以改善大肠杆菌的生长条件,减少乙酸对细胞生长的抑制作用。63033
中空纤维膜过滤器和大孔离子交换树脂在去除乙酸中的效果如何?
中空纤维膜过滤器和大孔离子交换树脂在去除乙酸中的效果各有特点:
大肠杆菌高密度培养中乙酸产生问题1 | 乙酸抑制 大肠杆菌高密度培养中乙酸产生影响细胞生长。 |
透析技术降低乙酸含量2 | 透析技术 通过透析除去发酵液中乙酸,实现高密度发酵。 |
控制葡萄糖浓度减少乙酸2 | 葡萄糖控制 控制葡萄糖浓度以减少乙酸产生。 |
乙醛酸旁路活性分析6 | 代谢通量分析 激活乙醛酸旁路减少乙酸积累。 |
中空纤维膜过滤器去除乙酸7 | 膜过滤技术 使用中空纤维膜过滤器去除发酵产生的乙酸。 |
大孔离子交换树脂吸附乙酸7 | 离子交换树脂 吸附发酵期间产生的乙酸,提高产物产量。 |
大肠杆菌1 | 工业生产菌种 用于高密度发酵,产生乙酸。 |
重组大肠杆菌3 | 基因工程关键 高密度发酵中乙酸控制重要。 |
大肠杆菌BL216 | 代谢通量分析 乙醛酸旁路活性,降低乙酸积累。 |
大肠杆菌JM1017 | 离子交换树脂 吸附乙酸,提高密度和产量。 |
大肠杆菌1 | 工业生产菌种 产生乙酸抑制生长。 |
大肠杆菌BL216 | 乙醛酸旁路活性 降低乙酸盐积累。 |
大肠杆菌JM1017 | 离子交换树脂 吸附乙酸提高密度。 |