细胞划痕实验的步骤

• 细胞划痕实验步骤如下。

实验前准备

• 学习：了解实验目的、所用试剂耗材、基本操作和注意事项、结果分析等。1
• 耗材：六孔板、马克笔、直尺、200ul枪头、PBS、完全培养基等。1
• 规划：根据细胞生长速度和拍照时间提前规划实验，建议预实验。1

实验步骤

• 划线：六孔板底面用马克笔顺直尺画三条横线作为标记线。1
• 种板：根据分组种板，细胞密度约5x10^5个/孔，铺匀。1
• 划痕：细胞长满后，用直尺比着，200ul枪头垂直于孔板和标记线划两条垂线。1
• 清洗：弃去旧培养基，用PBS轻轻润洗至划下来的细胞冲洗干净。1
• 加液：根据分组分别加入加药培养基或无血清培养基。1
• 拍照观察：划痕、清洗、加液完成后，用显微镜拍不同倍数照片作为0h对照，放入培养箱培养，定期观察并拍照。1
• 数据分析：统计细胞迁移距离或划痕面积，用ImageJ软件分析。1

注意事项

• 工具消毒：直尺和马克笔等工具用前务必照紫外消杀。1
• 细胞数目：种板所用细胞数目可根据细胞生长快慢调整，保证铺板密度一致。1
• 画线：提前用马克笔画好线，避免细胞种板后不好操作。1
• 拍照定位：根据交叉点定位拍照，避免位置不固定。1
• 清洗：务必清洗干净划下来的活细胞，避免影响结果。1
• 拍照记录：0h拍照时标记拍照位置，以便后续拍摄同一位置。1
• 培养基选择：根据细胞种类，选择无血清或低血清培养基，或用丝裂霉素处理抑制细胞分裂。1
• 拍照时间：一般拍照时间为0，2，4，6，8，10，12，16，24小时等，不建议超过24小时。1