保证所用酶的纯度，避免内切核酸酶或外切核酸酶的污染

在分子生物学实验中，保证所用酶的纯度至关重要，以避免内切核酸酶或外切核酸酶的污染。13 限制性内切酶（Restriction Endonucleases）是一类能够识别特定DNA序列并在其特定位置切割双链DNA的重要工具酶，它们主要来源于细菌，种类繁多。24 为了确保实验的准确性和重复性，必须避免其他酶的污染，尤其是外切核酸酶，因为它们可能会消化掉DNA分子黏性末端的突出部分，从而阻止和降低重组产物的形成。13

此外，限制性内切酶的保存和操作条件也对其活性和纯度有重要影响。酶应保存在-20℃的环境中，并且在操作时应保持在冰浴中，以避免长时间置于高温中可能导致的酶失活或降解。6 同时，由于限制性内切酶溶液通常含有50%甘油，加入反应管后，由于密度较大，酶往往会沉淀至溶液底部，因此在操作时应轻柔且充分混合以确保酶的均匀分布。6

在进行酶切反应时，应使用带盖的Eppendorf管，并遵循酶提供的NEBuffer进行反应体系的配置，以确保酶的活性单位能够在适当的条件下彻底消化底物DNA。5 通过这些细致的操作和注意事项，可以最大限度地保证所用酶的纯度，从而提高实验的成功率和可靠性。