E棋盘法怎么确定最佳包被浓度

E棋盘法是一种用于确定最佳包被浓度的方法，通常用于夹心法ELISA实验中。以下是确定最佳包被浓度的步骤：

1. 初步确定浓度：首先，需要根据实验目的和预期的抗原浓度，初步确定一个包被抗体的浓度范围。1

2. 倍比稀释：在确定了初步浓度后，使用同一个原始浓度进行倍比稀释，以减少加样枪和人为误差。1

3. 棋盘滴定：通过棋盘滴定法，同时选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度。例如，可以选择三个不同的包被抗体浓度和三个不同的酶标抗体浓度，进行交叉实验。23

4. 加入抗原：在棋盘滴定的基础上，将强阳性抗原、弱阳性抗原和阴性对照分别加入到不同的包被孔中。2

5. 测定吸光度：通过测定每个孔的吸光度（A值），可以得到多个数据点。

6. 分析数据：以强阳性抗原的A值在0.8左右，阴性对照的A值小于0.1为最佳工作条件，分析数据以确定最佳包被浓度。根据表3的测定结果，可以知道包被抗体的最佳浓度。2

7. 进一步滴定：如果需要更精确的浓度，可以根据初步确定的浓度缩小间距，再做进一步的棋盘滴定，寻找最佳包被条件。1

8. 加样方法：在实验中，可以参考特定的加样方法，如表中所示的包被不同浓度单抗的方法。1

通过上述步骤，可以系统地确定夹心法ELISA中包被抗体和酶标抗体的最佳工作浓度。4