质粒和mRNA如何共转CHO，如何确保质粒中没有RNAse的影响

质粒和mRNA共转染到CHO细胞（一种常用的哺乳动物细胞系）中，通常是为了同时引入目的基因和调控元件，以及可能的报告基因或siRNA等。以下是共转染的基本步骤和确保质粒中没有RNase影响的方法：

共转染步骤

1. 准备质粒和mRNA：确保质粒DNA和mRNA的质量高，纯度高，无杂质。613
2. 选择转染试剂：选择适合CHO细胞的转染试剂，如Lipofectamine® 2000等。7
3. 优化转染条件：根据细胞类型和转染试剂的说明书，优化转染条件，包括DNA和mRNA的浓度、转染试剂的用量、转染时间等。
4. 复合物形成：将质粒DNA和mRNA与转染试剂混合，形成DNA-阳离子脂质体复合物。注意在无血清条件下形成复合物，以避免血清中的蛋白质干扰。9
5. 转染细胞：将复合物加入到CHO细胞中，进行转染。转染后，根据需要可添加含有血清的培养基以维持细胞生长。
6. 筛选和鉴定：转染后，根据实验目的，可能需要进行筛选和鉴定，如使用抗生素筛选稳定转染的细胞，或通过荧光显微镜观察报告基因的表达情况。

确保无RNase影响

1. 使用RNase-free材料：在提取质粒和制备mRNA的过程中，使用RNase-free的试剂和耗材，以避免RNase的污染。4
2. 戴手套操作：在操作过程中，始终佩戴一次性手套，以减少皮肤碎屑和汗液等可能含有RNase的来源。
3. 使用RNase抑制剂：在提取和转染过程中，可以添加RNase抑制剂，以降低RNase的活性。
4. 清洁实验台：在实验前，使用70%酒精或其他消毒剂清洁实验台，以消除可能的RNase污染源。
5. 避免交叉污染：在不同实验步骤之间，更换手套和移液器吸头，避免交叉污染。

通过上述步骤，可以有效地进行质粒和mRNA的共转染，并确保实验过程中不受RNase的影响。1116

质粒和mRNA共转CHO细胞时，如何优化转染条件以提高效率？

在进行质粒和mRNA共转染CHO细胞时，优化转染条件以提高效率的关键在于选择合适的转染试剂、调整细胞密度、以及优化转染复合物的制备条件。首先，选择适合的转染试剂对于提高转染效率至关重要。例如，脂质体转染法具有较高的转染效率，但需注意其对细胞的毒性，因此需要摸索脂质体与质粒的比例、细胞转染时间等条件28。其次，细胞密度的优化也是提高转染效率的一个重要因素。在转染时，细胞密度应控制在70%~80%，这有助于质粒DNA进入细胞核2631。此外，转染复合物的制备条件，如DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，也是影响转染效率的关键因素。血清可以在复合物形成后加入，以避免影响复合物的形成9。

在进行质粒和mRNA共转染时，如何避免RNAse对实验结果的影响？

避免RNAse对质粒和mRNA共转染实验结果的影响，需要采取一系列预防措施。首先，实验人员在处理RNA时应佩戴手套，以减少外源性核糖核酸酶的污染25。其次，使用无核糖核酸酶的试剂、试管和屏障移液器吸头来制备转染用RNA，这有助于降低RNA被降解的风险。此外，使用70%乙醇或其他核糖核酸酶去污液（如RNaseZap RNase去污液）擦拭工作区域，可以有效减少环境中的RNAse25。通过这些措施，可以显著降低RNAse对实验结果的潜在影响。

在共转染过程中，如何确保质粒DNA和mRNA的稳定性？

确保质粒DNA和mRNA在共转染过程中的稳定性，需要关注几个关键方面。首先，质粒DNA的提取过程中应去除RNA，以避免RNA与质粒DNA的非特异性结合，影响其稳定性1。其次，mRNA在转染前需要进行适当的加工和修饰，如5'端帽子修饰和3'端多聚腺苷酸尾巴的形成，这有助于提高mRNA的稳定性和蛋白质表达效率46。此外，转染过程中应使用无核糖核酸酶的试剂和耗材，以防止mRNA被降解25。最后，转染后及时更换为完全生长培养基，以支持细胞的生长和外源基因的表达37。

在CHO细胞中进行共转染时，如何选择适合的转染试剂？

在CHO细胞中进行共转染时，选择适合的转染试剂需要考虑转染效率、细胞毒性和操作便利性。脂质体转染法因其较高的转染效率和对基因片段大小限制较小而常用于CHO细胞的转染28。然而，阳离子脂质体可能对细胞具有一定毒性，因此在实验中需要优化脂质体与质粒的比例以及转染时间，以降低毒性并提高转染效率28。此外，PEI（聚乙二醇化胺）转染试剂因其对血清和抗生素的兼容性强，操作简便，也是共转染的一个良好选择31。在选择转染试剂时，还应考虑试剂与细胞类型的相容性，以及是否支持DNA和RNA的共转染。

在进行质粒和mRNA共转染时，如何评估转染效果和基因表达水平？

评估质粒和mRNA共转染的效果和基因表达水平，可以通过多种方法实现。首先，使用显微镜或流式细胞仪测定转染细胞和GFP蛋白表达细胞的百分比，这可以直观地反映转染效率51。其次，通过qPCR或Western blot等分子生物学技术，可以定量分析目的基因的mRNA和蛋白质表达水平。此外，如果共转染的质粒含有易于检测的标记基因，如荧光蛋白基因，也可以通过观察荧光信号来评估转染效果3。最后，对于蛋白质的功能研究，可以通过相关生物学实验或细胞活性测试来评估基因表达后的生物学效应。通过这些方法的综合应用，可以全面评估共转染的效果和基因表达水平。