组织解离的方法
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组织解离是细胞生物学研究中的一项基础技能,它涉及将组织块分离成单细胞悬液的过程。目前,组织解离的方法主要有以下几种:
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机械分离法:这是一种物理方法,通过切割、挤压或刮擦等手段分解组织。机械分离法简单且处理速度快,尤其适用于松散关联的样本,如骨髓、淋巴结、脾脏等组织。然而,这种方法的稳定性较差,每次分离得到的细胞产量和存活率可能会有较大差异1。
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酶解法:使用特定的蛋白酶,如胰蛋白酶或胶原酶,来分解细胞组织样品,释放目标细胞。酶解法适用于较为紧密的组织,合适的消化酶能加快细胞解离速率,有利于获得更高的细胞产量1。例如,使用TrypLE™产品可以直接替代现有的方案,通过一系列步骤,包括使用不含钙和镁的Dulbecco磷酸缓冲盐溶液(D-PBS)冲洗培养瓶,然后加入预热的TrypLE™并37°C下孵育,直至细胞分离2。
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化学法:尽管在提供的资料中没有详细描述化学法的具体操作,但通常指的是使用化学物质来帮助组织解离。
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自动化组织处理器:自动化组织处理器结合机械法与酶法双重作用,可以快速从各种组织中解离出高质量的单细胞悬液。例如,Singleron PythoNTM组织解离仪采用机械+酶解法,配备sCelLive™组织解离液和一次性解离管,自动化完成单细胞悬液的制备4。
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gentleMACS™ 样本制备技术:由gentleMACS组织解离器、gentleMACS样品管和组织特异性解离试剂盒系列组成,满足无菌且全封闭的样本制备要求,提供样品和操作人员的安全保障6。
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螯合剂解离法:这是一种较少提及的方法,可能涉及使用螯合剂来帮助细胞从组织中分离出来。
在实际操作中,选择哪种解离方法取决于组织的特性、目标细胞类型以及实验的具体要求。例如,在神经科学的研究中,由于神经组织细胞间紧密的黏附性及轴突和树突的易碎性,自动化组织处理器结合机械法与酶法双重作用可以获得高质量的细胞悬液7。此外,从原代组织中分离细胞时,酶解聚是一种常用的方法,细胞暴露在酶中的时间应尽可能短以保持活性8。