分子生物学

N,N-dimethylalanine 是一种氨基酸衍生物。 氨基酸衍生物的定义 氨基酸衍生物**：以氨基酸为原料或前体，通过化学合成反应生成的物质。 N,N-dimethylalanine 的特性 化学结构**：N,N-dimethylalanine 是由丙氨酸（alanine）衍生而来，通过在丙氨酸的氮原子上添加两个甲基基

蛋白质是生物大分子的重要组成部分，具有多样的结构和功能。 蛋白质的多样性和功能 结构和功能分化**：蛋白质在细胞中扮演多种角色，每个蛋白质都有其独特的功能。 生命活动的主要承担者**：蛋白质是构成细胞的基本有机物，参与机体的每一个细胞和所有重要组成部分。 蛋白质的组成 氨基酸基本单位**：蛋白质由氨基酸组成，这些氨基酸

λDNA是λ噬菌体中的DNA，是一种溶原性的染色体序列，能够整合到宿主染色体组上或脱离下来，其整合和脱离过程中的失误可导致宿主基因重组现象，因此可作为基因转化的载体。

🧬 qPCR技术概述 🔍 qPCR定义与原理 实时荧光定量PCR**：实时荧光定量PCR（RT-PCR）是一种利用荧光信号来实时监测PCR扩增过程的技术，可以对DNA或RNA进行定量分析。 序列检测试剂**：通过使用序列检测系统（SDS）仪器进行PCR产物检测，如SYBR Green I染料试剂，能够与双链DNA结合，实现定量

cfDNA是循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。它属于血中cfDNA范畴，是血浆游离DNA的一种。cfDNA在血液中是以裸露核酸的形式存在，高度片段化，片段长度约为166bp，可能源于细胞凋亡进程中核小体所含核酸片段的长度。其来源可能来自于细胞的凋亡进程中片段化的DNA、坏死的细胞的DNA碎片以及细胞分泌的exosome等^1^。

突变基因定量检测是利用生物技术对特定基因突变进行精确测量的过程。 突变基因定量检测 技术应用**：液体活检技术通过检测无细胞DNA（cfDNA）中的循环肿瘤DNA（ctDNA）来识别和跟踪癌症相关的基因突变。 检测难点**：由于癌症突变分子在总cfDNA中的比例较低，因此检测具有挑战性，需要高灵敏度和特异性的技术。 数字PC

分子信标（Molecular Beacons）是一种特殊设计的寡核苷酸探针，它们具有发夹结构，通常包含一个报告基团（如荧光团）和一个淬灭基团。分子信标的茎部（stem）是由互补的序列组成的，这些序列在分子信标未与目标序列结合时形成双链结构，使报告基团和淬灭基团靠近，从而抑制荧光。当分子信标与目标序列结合时，茎部打开，荧光增强。 分子信标的茎部序列没有固定的

染色体外环状DNA（extrachromosomal circular DNA, eccDNA）是一种存在于染色体外的环状DNA分子，它在细胞中具有独特的分子结构和功能。eccDNA可以携带完整的基因，大小通常在1到3Mb之间，能够在光学显微镜下观察到。这种DNA分子在肿瘤等疾病中的作用尤其受到关注，因为它们与基因组不稳定性有关。 发现历程 环状D

蛋白质的空间结构由多种因素决定。 影响因素 氨基酸序列**：蛋白质的一级结构，即氨基酸的排列顺序，是决定其空间结构的基础。 二硫键**：在蛋白质折叠过程中，二硫键的形成对蛋白质的空间结构有重要影响。 翻译后修饰**：如磷酸化等翻译后修饰可以改变蛋白质的构象，从而影响其功能。 分子伴侣**：在蛋白质折叠过程中，分子伴

c. Tertiary 蛋白质结构 三级结构**：定义为由多个多肽链组成的蛋白质中，多肽链的三维排列。三级结构包括所有主链和侧链的结构，是蛋白质功能的关键。

HEK 293细胞瞬时转染表达蛋白是一种高效方法。 HEK 293细胞瞬时转染 高密度悬浮培养**：使用如Expi293表达系统，结合高密度293F细胞、优化培养基和专用转染试剂，实现快速、高产量的蛋白生产。 操作简便**：瞬时转染法操作简易、周期短，适合快速表达高活性蛋白，无需筛选基因，适用于结构生物学研究。 表达载体选择

四级结构 蛋白质结构层次 一级结构**：氨基酸残基的线性排列顺序，包括二硫键的位置。 二级结构**：局部折叠形成α-螺旋、β-折叠等。 三级结构**：整个多肽链的三维折叠形态。 四级结构**：由多种多肽组成的蛋白质中多肽的三维排列。

蛋白质的空间结构由多种因素决定。 影响因素 氨基酸序列**：蛋白质的一级结构，即氨基酸的排列顺序，是决定其空间结构的基础。 氨基酸的立体异构形式**：虽然蛋白质中的氨基酸通常具有相同的立体化学构型，但不同构型的存在可能影响蛋白质结构。 氨基酸侧链的空间限制**：氨基酸侧链的体积和形状对蛋白质的折叠和结构有重要影响。 *

四级结构（quaternary structure）。 蛋白质结构层级 一级结构**：氨基酸残基在蛋白质肽链中的排列顺序。 二级结构**：蛋白质多肽链本身的折叠和盘绕方式，如α-螺旋、β-折叠。 三级结构**：在二级结构基础上，多肽链进一步盘绕、卷曲和折叠形成的三维结构。 四级结构**：多个蛋白质亚基（即多肽链）之间

Western blot是一种用于检测特定蛋白质的技术，通过将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。以下是Western blot的详细步骤和原理： Western Blot步骤 蛋白质样品制备： 从细胞或组织中提取蛋白质样品。 使用裂解缓冲液裂解细胞，释放蛋白质。 SDS-PAGE电泳：

构建aβ42表达载体的方法涉及将aβ42基因插入到表达载体中，并导入大肠杆菌宿主进行表达。 技术实现要素 载体选择**：使用pet22b表达载体，该载体含有T7启动子和His标签，有助于提高表达量和后续纯化。 基因插入**：将aβ42基因酶切后与载体连接，构建重组质粒。 宿主转化**：将重组质粒转化至大肠杆菌，通过诱导表达a

组蛋白与DNA的解离依赖于盐浓度。 盐浓度对组蛋白与DNA解离的影响 高盐浓度**：在高盐浓度下，组蛋白与DNA之间的静电作用减弱，导致两者解离。 低盐浓度**：低盐浓度或稀酸环境下，组蛋白的碱性基团质子化，失去与DNA的结合能力，促进解离。 实验操作**：实验中通过调整NaCl溶液的浓度，可以有效地分离DNA和组蛋白。

实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，简称qPCR）是一种在DNA扩增反应中，通过荧光化学物质测量每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。以下是进行qPCR反应的一般程序： 样品准备：首先需要提取和纯化目标DNA或RNA样品。对于RNA样品，通常需要进行逆转录生成cDNA作为PCR模板。